ГОСТ 28087-89
Группа Р31

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ВАКЦИНА ПРОТИВ БОТУЛИЗМА НОРОК

Технические требования и методы контроля

Vaccine for mink botulism. Technical requirements and methods of control

МКС 11.220
ОКСТУ 9382

Дата введения 1990-01-01

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 31.03.89 N 916

3. Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 6282-88

4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

6. Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)

7. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2007 г.


Настоящий стандарт распространяется на вакцину против ботулизма норок, изготовленную из культуры штамма Сl.botulinum типа С-альфа, инактивированную формалином и осажденную алюмокалиевыми квасцами и предназначенную для профилактической иммунизации норок.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

По физико-химическим и иммунобиологическим свойствам вакцина должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.

Таблица 1

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

2.1. Отбор проб

2.1.1. Для проверки качества вакцины против ботулизма норок из разных мест каждой серии отбирают 20 флаконов, из которых 10 используют для проведения испытания, а 10 - хранят в архиве государственного контролера в пределах срока годности препарата.

2.1.2. Пробы, направляемые в архив, опечатывают и снабжают документом установленной формы с указанием:

наименования биопрепарата;

даты изготовления;

номера серии;

номера контроля;

даты отбора проб;

объема серии;

срока годности;

обозначения настоящего стандарта;

должности и подписи лица, отобравшего пробу.

2.2. Определение внешнего вида

Внешний вид определяют визуально. Каждый флакон с вакциной встряхивают, просматривают в проходящем свете и одновременно проверяют герметичность укупорки, наличие трещин и правильность этикетирования.

2.3. Определение концентрации водородных ионов (рН)

Для проведения испытания используют два флакона с вакциной.

Концентрацию водородных ионов вакцины определяют электрометрическим методом, применяя потенциометры. Порядок определения - в соответствии с правилами, приложенными к прибору.

2.4. Определение типичности микрофлоры

Сущность метода заключается в определении типичности микрофлоры при микроскопическом исследовании окрашенных мазков из вакцины.

2.4.1. Аппаратура и материалы

Микроскоп биологический с иммерсионной системой по НТД.

Стекла предметные по ГОСТ 9284.

Масло иммерсионное по ГОСТ 13739.

Набор бактериологических красок.

2.4.2. Проведение испытания

Мазки готовят на предметных стеклах из 3 флаконов с вакциной. Мазки окрашивают по Граму и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.

2.4.3. Обработка результатов

Наличие грамположительных палочек с закругленными концами, овальных спор или палочек со спорой в форме теннисной ракетки свидетельствует о типичности данной микрофлоры.

2.5. Определение стерильности

Сущность метода заключается в определении отсутствия роста бактериальной и грибковой микрофлоры в посевах из вакцины на питательные среды.

2.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 28085.

2.5.2. Проведение испытания

Для определения стерильности используют 10 флаконов с вакциной. Перед проведением испытания флаконы с вакциной встряхивают до получения гомогенной взвеси.

Испытание проводят путем посева из каждого флакона по 1,0 см вакцины в 3 пробирки с МПБ, МПА, МППБ под вазелиновым маслом, агаром Сабуро или Чапека и по 2,0 см в два флакона с МПБ и МППБ под вазелиновым маслом.

Через 20 сут инкубирования из посевов во флаконах проводят пересев на все вышеуказанные среды.

2.5.3. Обработка результатов

Отсутствие роста бактериальной и грибковой микрофлоры в посевах вакцины на питательных средах после их выдерживания в термостате в течение 35 сут и в пересевах в течение 15 сут при температуре (37±0,5) °С, для среды Сабуро или Чапека при (22±1) °С, свидетельствует о стерильности вакцины.

2.6. Определение безвредности

Сущность метода заключается в определении реакции у лабораторных животных на введение вакцины в тест-дозе.

2.6.1. Аппаратура и материалы

Шприцы вместимостью 2 и 5 см по ГОСТ 22967.

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377*.
________________
* ГОСТ 25377-82 действует только на территории Российской Федерации (здесь и далее).


Флаконы стеклянные вместимостью 200 см.

Пипетки стеклянные мерные вместимостью 1, 5 и 10 см.

2.6.2. Подготовка к испытанию

Для проведения испытания используют 10 флаконов с вакциной. Из каждого флакона после тщательного встряхивания отбирают по 5-10 см вакцины в стерильной флакон, объединяя пробы.

2.6.3. Проведение испытания

Для определения безвредности вакцины используют белых мышей живой массой 18-20 г и морских свинок живой массой 350-400 г. Десяти белым мышам вакцину вводят подкожно в области спины по 1 см и пяти морским свинкам подкожно в области живота по 2 см.

2.6.4. Обработка результатов

Вакцину считают безвредной, если в течение 10 сут после ее введения не наступает гибель или заболевание животных. Допускается на месте введения вакцины образование припухлости.

2.7. Определение иммуногенной активности

Сущность метода заключается в определении специфической активности вакцины в сравнении с референс-препаратом.

2.7.1. Аппаратура и реактивы

Шприцы вместимостью 1 см по ГОСТ 22967.

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377.

Флаконы стеклянные вместимостью 100 см.

Пипетки стеклянные мерные вместимостью 5 и 10 см.

Референс-препарат сухой.

Токсин ботулический типа С.

2.7.2. Подготовка к испытанию

Для определения иммуногенной активности вакцины используют 10 флаконов с вакциной. Объединенную пробу вакцины для испытания готовят по п.2.6.2.

2.7.3. Проведение испытания

Иммуногенную активность вакцины определяют на белых мышах живой массой 18-20 г в параллельном опыте в сравнении с референс-препаратом.

Референс-препарат представляет собой сухую вакцину против ботулизма норок, фасованную в ампулы по 2 cм, с определенной иммуногенностью.

Вакцину и референс-препарат вводят однократно подкожно двум группам белых мышей по 40 голов в каждой группе. Одну группу белых мышей вакцинируют испытуемой вакциной, а вторую группу референс-препаратом. Мышей обеих групп иммунизируют дозами 0,05; 0,1; 0,2 и 0,4 см, используя по 10 белых мышей на каждую дозу испытуемой вакцины и референс-препарата.

Через 21 сут после вакцинации животным обеих групп вводят подкожно ботулический токсин типа С в дозе 10 ДЛМ. Одновременно токсин вводят 5 контрольным белым мышам такой же живой массой в дозе по 1 ДЛМ, которым не вводилась испытуемая вакцина и референс-препарат. Результаты учитывают в течение 120 ч с момента введения токсина.

2.7.4. Обработка результатов

Подсчитывают по каждой дозе в группе животных, вакцинируемых испытуемой серией вакцины, и группе животных, привитых референс-препаратом, отношение количества выживших животных к их числу, взятому для опыта.

Значения отношений суммируют по каждой группе отдельно.

По сумме отношений по табл.2 находят дозу испытуемой серии вакцины и дозу референс-препарата, предохраняющих от гибели 50% вакционированных белых мышей, а также прививочную дозу для норок.

Таблица 2

Результат контроля считают достоверным, если сумма отношений, полученная в группе животных, вакционированных референс-препаратом, находится в пределах 2,3-2,7. Если эта сумма отношений не соответствует указанным пределам, проводят контроль испытуемой серии вакцины на таком же количестве белых мышей.

Вакцину считают активной, если однократная ИД для белых мышей составляет 0,071- 0,21 см при гибели 60% -100% контрольных животных. Указанные дозы вакцин соответствуют прививочным дозам вакцин для норок в количестве от 1 до 2 см.

Пример определения иммуногенной активности вакцины приведен в приложении.

ПРИЛОЖЕНИЕ (справочное). Данные по учету результатов опыта по группам животных, вакцинируемых испытуемой серией вакцины, и животных, привитых референс-препаратом

ПРИЛОЖЕНИЕ
Справочное

В табл.3 и 4 приведены данные по учету результатов опыта по группам животных, вакцинируемых испытуемой серией вакцины, и животных, привитых референс-препаратом.

Таблица 3

Таблица 4

Используя сумму отношений числа выживших животных к числу животных, взятых для опыта по каждой группе, по табл.2 определяют значение дозы испытуемой серии вакцины и референс-препарата.

В данном примере референс-препарат защищает 50% иммунизированных животных в дозе 0,1 см, а испытуемая серия вакцины - в дозе 0,082 см. В приведенном примере доза испытуемой вакцины для норок будет составлять 1 см.