ГОСТ 29312-92
Группа Р35

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

АНТИТЕЛА И АНТИГЕНЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЯЩУРА

Технические условия

     
Antibodies and antigens for laboratory diagnostics of foot-and-mouth disease. Specifications

МКС 11.220
ОКП 93 8880

Дата введения 1993-01-01

     
     
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским ящурным институтом

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 28.02.92 N 187

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2004 г.


Настоящий стандарт распространяется на антитела в виде типо- и штаммоспецифических сывороток, а также на гомологичные им эталонные и диагностические антигены, предназначенные для лабораторной диагностики ящура сельскохозяйственных животных.

Требования и нормы, установленные в стандарте, являются обязательными.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Характеристики

1.1.1. Типо- и штаммоспецифические сыворотки и антигены должны изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим инструкциям, утвержденным в установленном порядке.

1.1.2.Типо- и штаммоспецифические сыворотки, независимо от их типовой и вариантной принадлежности, должны соответствовать требованиям, указанным в табл.1.

Таблица 1

1.1.3. Эталонные и контрольные штаммоспецифические антигены вируса разных типов должны соответствовать требованиям, указанным в табл.2.

Таблица 2

1.2. Упаковка

1.2.1. Типо- и штаммоспецифические сыворотки и эталонные (контрольные) антигены расфасовывают по 0,5-1 см в стерильные ампулы, высушивают методом лиофилизации при соответствующем режиме, обеспечивающем минимальные потери специфической активности и максимальную сохраняемость, герметизируют в атмосфере обезвоженного инертного газа.

1.2.2. Ампулы укладывают в картонные или полистироловые коробки по ГОСТ 12301 и упаковывают в транспортные контейнеры из дерева или картона по ГОСТ 10131 массой брутто не более 10 кг.

1.2.3. Внутрь каждого транспортного контейнера вкладывают этикетку с указанием наименования предприятия-изготовителя, наименования препарата, его количества в контейнере, номера серии, номера контроля, даты упаковывания, срока годности, номера или фамилии упаковщика.

1.3. Маркировка

1.3.1. На ампулы наклеивают или наносят несмываемой краской этикетки с указанием:

наименования;

болезни;

типа и штамма производственного вируса;

номера серии;

объема препарата, см;

даты изготовления (лиофилизации).

1.3.2. На коробки с ампулами наклеивают или наносят типографским способом этикетки с указанием:

наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;

наименования препарата;

болезни;

типа и штамма возбудителя;

номера серии;

номера контроля;

количества ампул в коробке;

даты изготовления;

условий хранения;

срока годности;

обозначения настоящего стандарта.

1.3.3. На каждое грузовое место наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков:

"Хрупкое! Осторожно", "Беречь от солнечных лучей" и предупредительную надпись "БИОПРЕПАРАТЫ!".

Маркировка, характеризующая упакованную продукцию, должна содержать следующие обозначения:

наименование препарата;

объем препарата;

срок годности;

условия хранения.

Совмещение на одной стороне транспортной тары транспортной маркировки и маркировки, характеризующей упакованную продукцию, не допускается.

2. ПРИЕМКА

2.1. Типо- и штаммоспецифические сыворотки и эталонные (контрольные) антигены принимают сериями. Под серией понимают определенное количество ампул с препаратом, изготовленным за один технологический цикл, одновременно расфасованным и лиофилизованным, оформленное документом о качестве с указанием номера контроля.

2.2. Каждая серия соответствующего диагностического препарата должна быть проверена ОБК предприятия-изготовителя.

2.3. Для контроля качества препарата из разных мест серии отбирают 1% ампул, но не менее 30 ампул, из которых 20 используют для анализа на соответствие требованиям настоящего стандарта, а остальные 10 - хранят в опечатанном виде в архиве государственного контролера в течение срока годности.

2.4. Ампулы, предназначенные для хранения в архиве, сопровождают документом о качестве с указанием:

наименования препарата;

даты изготовления;

номера серии;

номера контроля;

даты отбора проб;

общего количества упакованных ампул;

объема изготовленной серии;

обозначения настоящего стандарта;

должности и подписи бракера, отобравшего пробу.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ

3.1. Отбор проб

Из каждой выборки произвольно отбирают 20 ампул, из которых 5 используют для определения остаточной влаги, а остальные - для контроля на соответствие другим требованиям настоящего стандарта.

3.2. Определение внешнего вида

Внешний вид, цвет, наличие посторонних примесей, правильность этикетки, качество герметизации и упаковки определяют визуально, просматривая каждую ампулу при дневном освещении.

3.3. Определение растворимости

Сущность метода заключается в определении времени, необходимого для полного растворения сухого диагностикума в исходном объеме растворителя.

3.3.1. Аппаратура и материалы

Часы любого типа.

Пипетки мерные по ГОСТ 29227.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, раствор концентрации 0,15 моль/дм.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.3.2. Проведение испытания

В 3-5 произвольно взятые ампулы с препаратом добавляют изотонический раствор или дистиллированную воду в объеме, равном объему препарата до высушивания, и встряхивают легкими постукиваниями до полного растворения содержимого, фиксируя время с помощью часов.

3.4. Определение массовой доли влаги

Массовую долю влаги диагностикумов определяют по ГОСТ 24061.

3.5. Определение активности

Сущность метода заключается в титровании типо- и штаммоспецифических сывороток и эталонных антигенов в РСК с гомологичными контрольными иммунореагентами, отвечающими требованиям настоящего стандарта.

3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Бани водяные на 37, 56 и 100 °С.

рН-метр лабораторный.

Пробирки серологические.

Эксикаторы для создания атмосферы с повышенной влажностью.

Пипетки мерные в местимостью 1, 2, 5 и 10 см по ГОСТ 29227.

Штативы лабораторные.

Антигены эталонные и сыворотки диагностические против 7 типов вируса ящура и других везикулярных болезней.

Сыворотка гемолитическая к эритроцитам брана (гемолизин).

Комплемент морской свинки.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, раствор концентрации 0,15 моль/дм.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.5.2. Определение активности типо- и штаммоспецифических сывороток

3.5.2.1. Подготовка к испытанию

Сухие сыворотки в количестве 5 ампул предварительно регидратируют в исходном объеме водой. Для испытания типоспецифических сывороток готовят ряд разведений на 0,15 моль/дм растворе хлористого натрия с интервалом 0,5 с 1:8 до предельного титра, указанного на этикетке.

Штаммоспецифические сыворотки разводят на два порядка дальше предельного титра. Контрольный (эталонный) антиген, гомологичный контролируемой сыворотке, и остальные компоненты РСК готовят по ГОСТ 25384.

3.5.2.2. Проведение испытания

Реакцию связывания комплемента выполняют с 2 АЕ гомологичного антигена по ГОСТ 25384 в трехкратной повторности.

3.5.2.3. Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально.

Предельным титром сыворотки (1 СЕ) считают ее максимальное разведение, обусловившее задержку лизиса более 90% эритроцитов в присутствии 2 АЕ гомологичного антигена.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов всех титрований, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 0,5 .

3.5.3. Определение активности штаммоспецифических антигенов

3.5.3.1. Подготовка к испытанию

Сухие антигены в количестве 5 ампул предварительно регидратируют в исходном объеме воды, а затем готовят ряд разведений с интервалом в 1 с 1:2 до предельного титра, указанного на этикетке. Штаммоспецифические сыворотки, гомологичные контролируемому антигену, и остальные компоненты РСК готовят по ГОСТ 25384.

3.5.3.2. Проведение испытания

Реакцию связывания комплемента выполняют с 2 СЕ гомологичной сыворотки по ГОСТ 25384 в трехкратной повторности.

3.5.3.3. Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально.

Предельным титром антигена (1 АЕ) считают максимальное разведение, обусловившее задержку лизиса более 90% эритроцитов в присутствии 2 СЕ гомологичной сыворотки.

За окончательный результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов всех титрований, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 1,0 .

3.6. Определение специфичности

Сущность метода заключается в титровании типо- и штаммоспецифических сывороток и эталонных антигенов в РСК с наборами гетерологичных иммунореагентов.

3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы - по п.3.5.1.

3.6.2. Определение специфичности типо- и штаммоспецифических сывороток

3.6.2.1. Подготовка к испытанию

Сухие штаммоспецифические сыворотки в количестве 5 ампул регидратируют и разводят, как указано в 3.5.2.1. Помимо гомологичного антигена готовят рабочие разведения всех гетерологичных антигенов и остальных компонентов РСК по ГОСТ 25384.

3.6.2.2. Проведение испытания

Реакцию связывания комплемента выполняют по ГОСТ 25384 с 2 АЕ гомологичного и гетерологичных антигенов, в перечень которых при контроле типоспецифических сывороток включают антигены всех 7 типов вируса ящура и возбудителей других везикулярных болезней, а при контроле штаммоспецифических сывороток используют антигены актуальных вариантов вируса ящура.

3.6.2.3. Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально. Во всех повторностях с антигенами возбудителей других везикулярных заболеваний реакция должна быть отрицательной, а с антигенами гетерологичных типов и вариантов - не превышать норм, установленных в табл.1.

В контроле всех разведений сыворотки без комплемента должна быть 100%-ная задержка лизиса эритроцитов, а в контроле без антигенов - их полный лизис.

3.6.3. Определение специфичности штаммоспецифических антигенов

3.6.3.1. Подготовка к испытанию

Контролируемые антигены разводят в количестве 5 ампул, как указано в п.3.5.3.1. Рабочие разведения гетерологичных сывороток и остальных компонентов РСК готовят по ГОСТ 25384.

3.6.3.2. Проведение испытания

РСК выполняют по ГОСТ 25384 в трехкратной повторности с 2 АЕ гомологичных и гетерологичных сывороток, в перечень которых включают сыворотки против всех 7 типов вируса ящура, а также возбудителей других везикулярных болезней.

3.6.3.3. Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально. Во всех повторностях с сыворотками других везикулярных болезней реакция должна быть отрицательной, а с сыворотками гетерологичных типов и вариантов - не превышать норм, установленных в табл.2.

В контроле всех разведений антигена без комплемента должна быть 100%-ная задержка лизиса эритроцитов, а в контроле без сыворотки - их полный лизис.

3.7. Определение вирулентности штаммоспецифических антигенов

Сущность метода заключается в выявлении биологической активности остаточного вируса при инокуляции исследуемого антигена 4-6 сут мышатам или в монослойные культуры клеток первично-трипсинизированных почек свиней 2-4- месячного возраста (СП).

3.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Термостат на 37 °С.

Шприцы "Рекорд" вместимостью 1 см.

Иглы инъекционные N 0625 или 0420 по ГОСТ 25377*.
_______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 25377-82.

Пробирки серологические.

Пипетки мерные вместимостью 1, 2 и 5 см по ГОСТ 29227.

Мышата белые нелинейные 4-6-суточного возраста.

Белые мыши-самки лактирующие (кормилицы).

Культуры клеток СП, выращенные в пробирках, флаконах вместимостью 50-100 см или в пенициллиновых флаконах и отмытые от ростовой среды.

Раствор солевой Эрла с 0,5% гидролизата лактальбумина (рН 7,6) и антибиотиками по стандартной прописи (поддерживающая среда).

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, раствор концентрации 0,15 моль/дм (рН 7,0-7,2).

Хлороформ свежедистиллированный или отмытый от водорастворимых фракций.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.7.2. Подготовка к испытанию

Сухие антигены в количестве 5 ампул предварительно регидратируют в исходном объеме водой или раствором хлористого натрия концентрации 0,15 моль/дм и готовят два разведения 1:10 и 1:100 на солевом растворе Эрла с гидролизатом лактальбумина и антибиотиками. Флаконы (пробирки) с монослойной культурой клеток СП освобождают от поддерживающей среды.

3.7.3. Проведение испытания

3.7.3.1. Выявление вируса с использованием культуры клеток

Каждое разведение испытуемого антигена вносят в 3-5 флаконов вместимостью 50-100 см или 5-10 пробирок (пенициллиновых флаконов) с монослойной культурой клеток СП в объеме 1,0; 0,2 и 0,1 см соответственно на 1 ч при 37 °С. Затем растворы антигена удаляют, монослойные культуры ополаскивают поддерживающей средой, подогретой до 37 °С, вносят свежие порции поддерживающей среды в объеме 10; 2 и 1 см соответственно и инкубируют при 37 °С в течение 5 сут. В случае выявления признаков дегенерации монослоя клеточные культуры промораживают, оттаивают, осветляют центрифугированием и используют для пассажа на культуре клеток СП.

При появлении признаков дегенерации монослоя клеток и во втором пассаже полученную культуральную жидкость после термолиза эмульгируют в течение 3-5 мин с хлороформом (10-15%) для очистки от балластных веществ и исследуют в РСК по ГОСТ 25384 на наличие специфических антигенов размножающегося вируса ящура.

3.7.3.2. Выявление вируса с использованием белых мышат

Разведения испытуемого антигена вводят в дозе 0,1 см подкожно 10 белым мышатам, которых вместе с двумя самками-кормилицами помещают в клетки для лабораторных животных. За инокулированными животными наблюдают 7 сут. Павших в течение этого периода мышат используют для дальнейшего пассирования. С этой целью готовят 10%-ную суспензию скелетной мускулатуры павшего мышонка на поддерживающей среде и очищают ее 10-15%-ным раствором хлороформа. В случае гибели мышат во втором пассаже готовят 33-50%-ную суспензию их скелетной мускулатуры, обрабатывают ее 10-15%-ным раствором хлороформа и исследуют в РСК по ГОСТ 25384.

3.7.4. Обработка результатов

Антиген считают вирулентным, если выявляемая в любом пассаже дегенерация монослойной культуры клеток СП или гибель мышат обусловлены репродукцией вируса с накоплением специфического комплеменсвязывающего антигена.

3.8. Определение стандартности расфасовки сухих сывороток и антигенов

Сущность метода заключается в определении колебаний массы препарата, высушенного в ампулах.

3.8.1. Аппаратура и реактивы

Шкаф сушильный с регулируемой температурой в диапазоне 60-105 °С.

Весы аналитические.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.8.2. Подготовка к испытанию

5 ампул сухого препарата освобождают от этикеток, тщательно моют и высушивают на воздухе или в термостате при 37 °С в течение 30 мин.

3.8.3. Проведение испытания

Высушенные ампулы порознь взвешивают, освобождают от содержимого, моют в воде, высушивают при 100 °С в течение 60 мин и повторно взвешивают.

3.8.4. Обработка результатов

По разности масс ампул до и после удаления содержимого находят массу препарата в каждой из них и высчитывают среднюю массу. Показатель варьирования массы препарата в процентах () вычисляют по формуле

,

где - масса препарата в отдельной ампуле, г;

- средняя масса препарата в 5 ампулах, г;

- сумма отклонений массы препарата в каждой отдельной ампуле от среднего значения, г.

4. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Типо- и штаммоспецифические сыворотки и эталонные антигены транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов, действующими на данном виде транспорта.

4.2. Диагностикумы хранят в темном сухом месте при температуре не выше 8 °С.

4.3. Гарантийный срок хранения нативных сывороток и сухих антигенов - 18 мес, а сухих сывороток - 24 мес со дня изготовления. По истечении указанных сроков препараты проверяют на активность и в случае ее сохранения в пределах, предусмотренных настоящим стандартом, они могут быть увеличены на 9 и 12 мес соответственно.