+7 (499) 255-20-06
+7 (499) 245-25-55
ул. Пречистенка, д.37, стр. 2

МЕДИЦИНСКИЕ УСЛУГИ

Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия

ГОСТ 20730-75

Группа Р35

     
     
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

     
     
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)

Технические условия

Nutrient media. Meat-pepton broth (for veterinary). Specifications*

______________
* Наименование стандарта. Измененная редакция, Изм. N 1.
 


Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. N 899 срок действия установлен с 01.01.1976 г. до 01.01.1981 г.*
________________
* Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС N 4, 1994 год). - Примечание изготовителя базы данных.

ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 1975 г.

ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.90 Постановлением Госстандарта СССР от 28.06.89 N 2194

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 11, 1989 год


Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Мясопептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующим технологическим регламентом из мясной воды по ГОСТ 20729-75 с добавлением 1% пептона и 0,5% хлорида натрия в разведениях 1:1, 1:2 и 1:4.

1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.

Таблица 1

Наименование показателя

Норма для разведений

1:1

1:2

1:4

Внешний вид

Прозрачная жидкость

Цвет

Желтый

Светло-желтый

Запах

Специфический, свежего мясного экстракта и пептона

Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка

Не допускается

Массовая доля общего азота, %, не менее

0,40

0,25

0,20

Массовая доля азота, аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %, не менее

0,09

0,06

0,04

Массовая доля пептонов, %, не менее

2,7

1,8

1,4

Массовая доля сухого вещества, %, не менее

3,0

2,0

1,1

Массовая доля белка, %, не более

0,60

0,40

0,30

Массовая доля хлористого натрия, %

0,8±0,1

Концентрация водородных ионов (рН)

7,2-7,6

Стерильность

Посев на питательные среды не должен давать роста микрофлоры в течение 3 сут в термостате при 37-38 °С

Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее, для

Staphylococcus aureus "Лоссманов"

0,70

0,30

Рост типичный

Escherichia coli штамм 675

0,75

0,40

То же

Streptococcus faecalis штамм 6783

0,40

0,25

"

1.1, 1.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.

2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.

2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л - 0,6 л.

Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.

2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.

2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Методы отбора проб

3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.

Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1). Пять флаконов используют для анализа, а пять - оставляют в архиве государственного контролера.

Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.

3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически.

3.4. Определение содержания общего азота

3.4.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

колбу Кьельдаля вместимостью 50-100 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) по ГОСТ 25336-82;

аппарат микро-Кьельдаль;

элемент нагрева (плитку, горелку);

пипетки на 1, 2, 5 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

бюретки по ГОСТ 20292-74;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;

кислоту серную по ГОСТ 4204-77, концентрированную и 0,1 н раствор;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 30-33%-ный и 0,1 н растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;

перекись водорода по ГОСТ 10929-76;

метиловый красный;

метиленовую синь;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000. - Примечание изготовителя базы данных.

метиловый оранжевый, 0,1%-ный раствор.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.4.2. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон в количестве 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора - перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) через каждые 15-20 мин до полного обесцвечивания раствора.

После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10-12 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.

В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 0,1 н раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 96%-ного этилового спирта.

Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30-33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) раствора.

Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации берут 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды.

3.4.3. Обработка результатов

Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне (ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1)) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1),


где ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество 0,1 н раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - поправочный коэффициент к титру 0,1 н серной кислоты;

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора гидрата окиси натрия;

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 0,1 н раствора серной кислоты, г.

За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±0,5%.

3.4.2, 3.4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5. Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов

3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;

пипетки, бюретки по ГОСТ 20292-74;

формалин технический по ГОСТ 1625-75*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 1625-89. - Примечание изготовителя базы данных.

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 0,1 н раствор;

фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5.2. Подготовка к испытанию

Непосредственно перед проведением анализа готовят формольную смесь. Для этого к 50 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) формалина добавляют 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.

3.5.3. Проведение испытания

К 2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) мясо-пептонного бульона приливают 18 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды и доводят 0,1 н раствором гидрата окиси натрия рН смеси до 7,0. Затем приливают 2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия до рН 9,2.

Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) мясо-пептонного бульона берут 2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды.

3.5.4. Обработка результатов

Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в мясо-пептонном бульоне (ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1)) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1),


где ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора гидрата окиси натрия;

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 0,1 н раствора гидрата окиси натрия, г;

2 - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.

3.5.2-3.5.4. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6. Определение содержания пептонов

3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр или спектрофотометр;

пипетки по ГОСТ 20292-74;

пробирки по ГОСТ 25336-82;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 10%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-78, 2%-ный раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;

центрифуги настольные типа ОПН-8-14,2.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.2. Подготовка к испытанию

3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах, по оси ординат - оптическую плотность (ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1)) согласно данным, приведенным в табл.2.

Таблица 2

Концентрация истинного пептона, %

Оптическая плотность, ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1)

0,50

0,550

0,25

0,280

0,17

0,190


3.6.3. Проведение испытания

В пробирку наливают 10 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) мясо-пептонного бульона в разведении 1:10, прибавляют по 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.

Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды.

Через 2 мин смесь центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000-4000ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1). Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540-560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.4. Обработка результатов

Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяют по градуировочному графику.

Оптическая плотность (ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1)) мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т.е. на разведение мясо-пептонного бульона).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.

3.7. Определение содержания сухого вещества

3.7.1. Аппаратура

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

шкаф сушильный лабораторный;

эксикаторы по ГОСТ 25336-82;

стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 25336-82;

пипетки по ГОСТ 20292-74.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.7.2. Проведение испытания

В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0-1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.

Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.

3.7.3. Обработка результатов

Содержание сухого вещества в мясо-пептонном бульоне (ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1)) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1),


где ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - масса пустой бюксы с крышкой, г;

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном после высушивания, г;

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.

3.8. Определение содержания бeлка (по методу Лоури)

3.8.1. Аппаратура и реактивы

Для проведения испытания применяют:

фотоэлектроколориметр;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки по ГОСТ 20292-74;

фильтры бумажные;

натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 0,1 н. раствор;

натрий углекислый по ГОСТ 84-76;

натрий виннокислый или калий виннокислый двузамещенный, 1%-ный раствор;

медь сернокислую по ГОСТ 4165-78;

натрий вольфрамовокислый по ГОСТ ГОСТ 18289-78;

натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931-74;

кислоту ортофосфорную 85%-ную;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-67*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 3118-77. - Примечание изготовителя базы данных.

литий сернокислый;

бром по ГОСТ 4109-79;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.8.2. Подготовка к испытанию

Приготовление реактива А

Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива В

Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 1%-ного раствора двузамещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.

Приготовление реактива С

Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В.

Приготовление реактива Д

Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.

В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы осторожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.

После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1:10 (1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) реактива и 9 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) воды) и титруют 0,1 н раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3-4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованного на титрование 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6-2,3 Н.

Приготовление реактива Е

Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н раствором кислоты, то для приготовления 1 н раствора Е надо брать 10 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) реактива Д и 13 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды.

Построение градуировочного графика для определения белка

Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п.3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды. Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).

Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по величине оптической плотности лежало в пределах 0,2-0,8, где точность измерения наиболее высокая.

3.8.3. Проведение испытания

В пробирку наливают 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) разведенного 1:10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) реактива Е. Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) дистиллированной воды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30-40 мин.

Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630-640 нм) против воды в 5-миллиметровых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помощью градуировочного графика определяют содержание белка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.

3.8.2, 3.8.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9. Определение содержания хлорида натрия

3.9.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы аналитические;

элемент нагрева (горелку, плитку);

пипетки по ГОСТ 20292-74;

бюретки по ГОСТ 20292-74;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;

квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205-77, насыщенный раствор;

калий роданистый по ГОСТ 4139-75 или аммоний роданистый, 0,1 н раствор;

кислоту азотную по ГОСТ 4461-77, концентрированную;

серебро азотнокислое по ГОСТ 1277-75, 0,1 н раствор;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9.2. Проведение испытания

2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) мясопептонного бульона помещают в стакан, добавляют 20 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) воды, 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) концентрированной азотной кислоты и 10 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.

Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.

3.9.3. Обработка результатов

Содержание хлорида натрия в мясо-пептонном бульоне (ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1)) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1),


где ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество 0,1 н раствора азотнокислого серебра, взятое в стакан с пробой, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора азотнокислого серебра;

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - поправочный коэффициент к титру 0,1 н раствора роданистого калия (или роданистого аммония);

0,005844 - количество хлорида натрия, соответствующее 1 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) 0,1 н раствора азотнокислого серебра;

ГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) - количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,01%.

3.9.2, 3.9.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10. Определение концентрации водородных ионов (рН)

3.10.1. Аппаратура и материалы

Для проведения испытания применяют:

рН-метр;

стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;

воронки стеклянные;

фильтры бумажные.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10.2. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют рН по инструкции, приложенной к рН-метру.

3.11. Определение стерильности

3.11.1. Аппаратура, материалы, реактивы

Для проведения испытания применяют:

термостат с температурой нагрева 37-38 °С;

автоклав;

флаконы вместимостью 200 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1);

пипетки по ГОСТ 20292-74;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;

агар микробиологический по ГОСТ 17206-84*.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 17206-96. Здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11.2. Подготовка к испытанию

Готовят в соответствии с действующей рецептурой, мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ) под маслом (среда Китт-Тароцци). Среды разливают по 8-10 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) в пробирки, закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1).

3.11.3. Проведение испытания

Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре. Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) в четыре флакона вместимостью 200 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1). Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6-8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37-38 °С. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.

3.11.2, 3.11.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11.4. Обработка результатов

При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.

При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов и пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.

3.12. Определение способности поддерживать рост микробов

3.12.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

весы технические;

термостат;

автоклав;

рН-метр;

пипетки по ГОСТ 20292-74;

бюретки по ГОСТ 20292-74;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

воронки стеклянные;

пробки ватномарлевые;

фильтры бумажные;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;

агар микробиологический по ГОСТ 17206-84.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.12.2. Подготовка к испытанию

Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают рН среды 7,4.

Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8-10 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1) в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1).

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.12.3. Проведение испытания

Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus "Лассманов", Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л.А.Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37-38 °С.

Рост культуры должен быть типичным и обильным.

3.12.4. Обработка результатов

Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.

Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ - визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620-640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.

4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

______________
* Наименование раздела. Измененная редакция, Изм. N 1.

4.1. Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 л. Допускается более мелкая расфасовка - флаконы вместимостью 200 и 500 смГОСТ 20730-75 Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия (с Изменением N 1).

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.3. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:

наименования препарата;

количества препарата, л;

номера серии препарата;

даты изготовления;

срока годности;

условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

4.4. Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4-10 °C.

4.5. Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п.4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18 °С, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.

4.6. Срок годности мясо-пептонного бульона 6 месяцев со дня изготовления. По истечении указанного срока мясо-пептонный бульон подвергают испытанию и в случаях соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности может быть продлен еще на 3 месяца.


Замена

ГОСТ 1277-75 введен взамен ГОСТ 1277-63.

ГОСТ 4139-75 введен взамен ГОСТ 4139-65.

ГОСТ 6371-73 введен взамен ГОСТ 6371-64.

ГОСТ 10394-72 введен взамен ГОСТ 10394-63.

ГОСТ 10515-75 введен взамен ГОСТ 10515-63.

ГОСТ 10931-74 введен взамен ГОСТ 10931-64.



Новости

2013.06.20

18 июня 2013 года наш врач акушер-гинеколог, кандидат медицинских наук Беришвили Манана Владимировна награждена медалью «Отличник здравоохранения России»

2013.05.27

На конгрессе выступила с докладом научный консультант МЦ «Чайка», кандидат медицинских наук, доцент Макарова М.Р.

2013.05.20

Определение риска развития рака